一、产品介绍

无血清非程序细胞冻存液（无酚红）高效、安全、稳定、操作便捷，与传统细胞冻存液相比 具 有明显优势，推荐用于常规哺乳动物细胞（包括肿瘤或转化细胞系、原代细胞、干细 胞、免疫细 胞等）的冻存，尤其适合无血清培养的细胞冻存。因本产品不含酚红，所以也适用于 激素相关实 验细胞的冻存。按照一般情况冻存 1 管细胞使用 1ml冻存液计算，本产品可以用于大 约 100 管细 胞的冻存。

二、使用方法
细胞冻存【冻存前，请确保细胞处于对数生长期】

1. 贴壁细胞制备细胞悬液：（悬浮细胞请忽略此步骤）

(1) 将旧培养基吸除，用 PBS 清洗两遍。

(2) 在培养瓶中加入少许胰酶，以能覆满瓶底为限。将培养瓶平置于培养箱中消化约 1～2 分 钟，期间在显微镜下观察，一旦发现细胞间隙增大、细胞变圆、比较松动后，立即终止消化（个别难消化细胞需要              延长消化时间，但要避免消化过度）。

(3) 加入适量温浴好的完全培养基终止消化，轻轻吹打均匀细胞。

2. 贴壁细胞和悬浮细胞的冻存：

(1) 取少量细胞悬液细胞计数 ，算出细胞总数和所需细胞冻存液的量 。细胞的冻存密度以 1 × 106 ～2×107 cells/ml 为宜。

(2) 将所需量的细胞悬液转移至适当离心管中，200～500×g，离心 3-5 分钟，弃上清收集细 胞。 （离心速度和时间取决于细胞类型）

(3) 向细胞沉淀中加入适量无血清非程序细胞冻存液，用移液器轻轻吹打以重悬细胞，分装于无菌细胞冻存管中，严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。

(4) 直接置于-80℃冰箱中储存，细胞可至少保存一年；或者-80℃过夜后，次日将细胞投入液氮中长期储存。

四、注意事项
1.冻存过程中，在将冻存液加入到细胞之后，请尽量在冰袋附近操作，因为低温可以避免保护剂对细胞造成损伤。

2. 请保证细胞冻存管完全密封，避免在复苏过程中冻存管炸裂。

3. 理论上，本产品适用于各种哺乳动物细胞的冻存，但因细胞系种类繁多，无法逐一验证，因此我们推荐您在第一次使用本产品之前，事先对所冻存的细胞进行至少为期 1 周的试验性细胞 冻 存复苏培养，确认性能后再进行正式冻存。

4. 本产品为无菌包装，无需过滤，请注意无菌取用。

5. 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套